Добро пожаловать на сайт медицинского оборудования и реагентов!

Профильным направлением деятельности нашей компании является продажа моноклональных и поликлональных антител для проведения научно-технических исследований.

Моноклональные антитела - антитела, вырабатываемые иммунными клетками, принадлежащими к одному клеточному клону, то есть произошедшими из одной плазматической клетки-предшественницы. Моноклональные антитела могут быть выработаны на почти любое вещество (в основном белки и полисахариды), которое антитело будет специфически связывать. Они могут быть далее использованы для детекции(обнаружения) этого вещества или его очистки. Моноклональные антитела широко используются в биохимии, молекулярной биологии и медицине. Поликлональные антитела получают из сыворотки крови иммунизированного животного, обычно кролика, барана или козы. Она содержит антитела неодинаковой специфичности по отношению к различным эпитопам полидетерминантного иммуногена. Поликлональные антитела образуются в результате функционирования многочисленных клеточных клонов и, следовательно, гетерогенны на самых разных уровнях: по классу и подклассу (изотипу) антител, их специфичности, титру и аффинности. Из одного и того же стока поликлональных антител можно приготовить препарат, содержащий антитела к множеству отдельных антигенов (полиспецифичность), антитела к небольшому числу антигенов (олигоспецифичность) или антитела к одному единнственному антигену (моноспецифичность).

Моноклональне антитела, как и поликлональные, используют в целом ряде методов.

Иммуноферментный анализ (сокращённо ИФА, англ. enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) - лабораторный иммунологический метод качественного определения и количественного измерения антигенов и антител. В основе ИФА лежит принцип специфического взаимодействия между антигеном и соответствующим ему моноклональным антителом (либо поликлональным антителом). Выявление образовавшегося комплекса проводят с использованием так называемого конъюгата, который представляет собой анти-антитело, соединённое с ферментной меткой (обычно используют пероксидазу хрена либо другие пероксидазы). Конъюгат может быть получен с использованием поликлональных антител (например, кроличьи антитела против иммуноглобулинов человека) или моноклональных антител, направленных против человеческих иммуноглобулинов определённого класса (M, G, А). В зависимости от того, какие антитела использованы, тест-система будет выявлять в исследуемом образце или специфические антитела независимо от их класса, или антитела лишь определённого класса (например, только имуноглобулин G или только иммуноглобулин M).

В реакциях преципитации (от лат. praecipitatio - стремительное падение), то есть при иммунной реакции осаждения комплекса антигена с антителом.

При проведении вестерн блоттинга (белкового иммуноблота, англ. Western blot) - метода, используемого для определения специфичных белков в образце. После проведения электрофореза белков в полиакриламидном геле их переносят на нитроцеллюлозную мембрану или PVDF, затедетектируют с использованием моноклональных или поликлональных антител, специфичных к заданному белку.

Принцип действия иммунохроматографического анализа состоит в том, что так называмемую тест-полоску погружают в биологическую жидкость. при этом она начинает мигрировать вдоль полоски по принципу тонкослойной хроматографии. Вместе с ней движется жидкая фаза, содержащая антитела. При наличии в жидкости исследуемого антигена он взаимодействует с антителами, циркулирующими вокруг полоски, и с антителами, жестко связанными с ее основой. Циркулирующие антитела содержат в себе специфический краситель. Антиген фиксируется на тест полоске, прикрепившись к фиксированному антителу, а на этот комплекс налипает окрашенное циркулирующее антитело. Визуально накопление антител с красителем проявляется в виде окрашивания тест полоски. При проведении анализа используют три типа антител:

1. Подвижные моноклональные антитела к исследуемому антигену или антителу, конъюгированные c красителем, который можно легко идентифицировать даже в самых малых концентрациях. Данные антитела нанесены вблизи участка погружения тест-полоски в физиологическую жидкость (мочу, кровь). И после погружения в биологическую жидкость циркулируют вокруг полоски.

2. Поликлональные антитела к исследуемому антигену или антителу, жестко иммобилизованные в тест-зоне полоски.

3. Вторичные антитела к моноклональным антителам, жестко иммобилизованные в контрольной зоне тест-полоски.

Метод проточной цитометрии предназначен для быстрого оптического измерения параметров клетки, ее органелл и происходящих в ней процессов. Регистрируют свет лазерного луча при прохождении через него клетки в струе жидкости, при этом степень световой дисперсии позволяет получить представление о размерах и структуре клетки. При поставновке диагноза для проточной цитометрии часто используют кровь, костный мозг, ликвор, суставную жидкость, плевральую жидкость, клетки тканей (например, опухолей). Клеточную суспензию метят флюоресцирующими моноклональными антителами или флуоресцентными красителями и подают в поток жидкости, проходящий через проточную ячейку. Фиксирующифлуореценцию детекторы позволяют определить размеры клеток, судить о соотношении ядро/цитоплазма, а так же о неоднородности и гранулярности клеток, определить субпопуляционный состав клеточной суспензии и др. Наиболее часто используемые флуорохромы

* Флуоресцеина изотиоцианат (FITC)

* Фикоэритрин (PE, RD1)

* Перидинин-Хлорофилл Протеин (Per-CP)

* Алофикоцианин (APC)

Тандемные красители:

* Фикоэритрин - Техасский красный (ECD)

* Фикоэритрин - Cy5 (PC5)

* Фикоэритрин - Cy7 (PC7)

Метод применяют для иммунофенотипирования клеток периферической крови, исследования иммунного статуса, определения фагоцитарной активности, определения внутриклеточных цитокинов. В онкологии - для количественного анализа внутриклеточных компонентов (ДНК), для анализа стадий клеточного цикла, выявления ануплоидного клона, определения пролиферативной активности ануплоидного клона, выявления специфических маркеров. В цитологии - для определения цитоморфологической принадлежности клетки размер, соотношение ядро/цитоплазма, степени асимметричности и гранулярности клеток, оценки активности внутриклеточных ферментов с помощью флуорогенных субстратов, определения экспрессии поверхностных антигенов, анализа стадий клеточного цикла, измерения физиологических параметров клетки (внутриклеточный pH, концентрация свободных ионов Ca2+, потенциал наружной клеточной мембраны). В гематологии -для анализа субпопуляционного состава клеток периферической крови, для подсчета ретикулоцитов, анализа тромбоцитов по специфическим маркерам. В фармакологии - для измерения экспрессии маркеров, измерения активности внутриклеточных ферментов, определения стадий клеточного цикла в рамках изучения механизмов воздействия различных биологически активных веществ на клеточном уровне.

В настоящее время проточная цитометрия применяется для выявления определённых клеток в исследуемых образцах (как бактериальных и грибковых, так и собственных клеток организма человека), определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам, а также мониторирования состояния вирусного процесса у ВИЧ-инфицированных пациентов.

Выявление бактериальных, грибковых, а также собственных клеток организма в биологических жидкостях крайне важно для диагностики многих заболеваний. Проточная цитометрия обладает в 100-1000 раз более высокой чувствительностью по сравнению с микроскопией и позволяет выявлять бактериальные клетки в количестве 10-100 в 1 мл крови. При более низкой концентрации бактерий в образце возможно проведение предварительной инкубации. Высокую чувствительность методу придает использование моноклональных антител, помеченных флуоресцирующим веществом.

Проточная цитометрия позволяет не только выявлять инфицирование микроорганизмами, но и определять спектр их чувствительности, причём, длительность исследования не превышает нескольких часов. Подвергнутые воздействию антибиотиков (in vivo или in vitro) микроорганизмы сравнивают с контрольными образцами того же штамма для установления их жизнеспособности, а также изменений в нуклеиновых кислотах, белках, оболочке клеток и т. п., что позволяет оценить как степень эффекта антибиотика, так и точку приложения его действия.

Ещё одной областью применения проточной цитометрии является мониторирование состояния вирусного процесса у ВИЧ-инфицированных лиц путём определения абсолютного количества CD4+ клеток и их доли в популяции лимфоцитов (отношение CD4+/CD8+). Методика может также использоваться для контроля эффективности проводимой терапии.